Het schilderij toont op allegorische wijze de geboorte van Karel V te Gent in 1500. Het kind ligt in een hemelbed met baldakijn. Zijn hoofd omgeven door een stralenkrans. Naast hem staan Juno Lucina, de godin van de geboorte, met kroon op het hoofd en scepter in de linkerhand, en een genius met de hoorn des overvloed. Twee groepen van drie vrouwen bevinden zich aan weerszijden van het bed. Links de drie Parken die de levensdraad van de prins spinnen, rechts de drie Gratiën, waarvan een de borsten ontbloot en een andere met een breed gebaar het kind aanwijst. Bovenaan links biedt een hand vanuit een wolk met de zodiactekens van Jupiter, Mars en venus de keizerskroon aan het kind aan. Het stadsgezicht op de achtergrond stelt vermoedelijk Gent voor met de poort van het prinsenhof waar volgens de historiografen Karel V geboren werd. De verschillende delen van de voorstelling worden door latijnse teksten verklaard. Deze zijn vermoedelijk een later toevoeging. Zoals blijkt uit de rekeningen van de museumcommissie werd het schilderij in 1847 gerestaureerd door de schilder Henri Vandervin. In 1866 poneerde Edmond De Busscher dat het anonieme werk dat werd toegeschreven aan Lucas de Heere of aan Sammeling Benjamin in 1559 werd vervaardigd voor het Kapittel van het Gulden Vlies dat in de kathedraal plaats had. Maar bij de tentoonstelling Wereldwijs, wetenschappers rond keizer Karel die in 2000 in Leuven werd georganiseerd kwam Carl van de Velde tot volgende bevindingen. Hij stelt dat het schilderij tot stand kwam naar aanleiding van de Blijde Intrede van de Aartshertogen Albrecht en Isabella in Gent in 1600 en dat het werk dus onmogelijk door Lucas de heere kan vervaardigd zijn, gezien deze in 1584 overleed.